Extracción de ADN de células de epitelio bucal humano.

Rosalind Franklin ha pasado a la historia por ser la autora de la famosa fotografía 51. Una imagen de la molécula de ADN tomada con una técnica absolutamente novedosa en su época: la difracción de Rayos X. Como años más tarde reconocieron tanto Watson como Crick, la visión de la imagen tomada por Rosalind Franklin, fue fundamental en el descubrimiento de la estructura del ADN. 
El ADN se encuentra en el núcleo de las células, unido a proteínas que reciben el nombre de histonas. Al conjunto ADN-proteínas se le denomina cromatina.  
Hoy en día es muy habitual realizar distintos tipos de pruebas tanto en medicina forense como en clínica, para las cuales es necesario extraer el ADN de las células. Una vez extraído, podemos comprobar si la secuencia genética correspondiente a cierta enfermedad que nosotros buscamos está presente o no, o bien si ciertas secuencias genéticas de la muestra coinciden o no con las presentes en una prueba policial (por ejemplo, restos de sangre, pelo o semen, recogidos en la escena del crimen). 
Cuando la extracción de ADN se hace en un laboratorio, ha de hacerse con mucho cuidado, para separar el ADN nuclear del resto de ADN (por ejemplo, ADN mitocondrial) que puede haber en la célula. Además, ha de obtenerse lo más puro posible (es decir, libre de proteínas etc.). 
Por otra parte, el ADN es muy lábil, es decir, se rompe fácilmente, tanto por métodos físicos (agitación brusca, etc.), como por métodos químicos (presencia de Dnasas en las manos, por ejemplo) por lo que una de las normas básicas cuando se trabaja con ADN es usar guantes para que las Dnasas de las manos no rompan el ADN con el que trabajamos y ser muy cuidadoso en su manipulación. 
Nosotros no vamos a tomar tantas precauciones, ya que no vamos a usar el ADN para secuenciarlo, etc., de modo que el resultado de nuestra extracción será un ADN muy contaminado y sucio, sin purificar; sin embargo, se verá la hebra de ADN en el tubo de ensayo con lo que conseguiremos el objetivo de esta práctica. 
 
Las células del epitelio bucal se desprenden fácilmente con solo enjuagarte la boca, por lo que es una forma fácil de obtener ADN procedente del núcleo de dichas células. 
Romperemos los núcleos de las mismas mediante una disolución hipertónica (con mucha sal) vaciándose su contenido en la disolución. Como en los núcleos de las células hay ARN, y proteínas, entre otras cosas, intentaremos separar el ADN de otras sustancias en la medida de lo posible. Esto lo conseguiremos con el detergente. 

MATERIAL 
-Agua destilada. 
-Sal común. 
-Detergente líquido o champú. 
-Bicarbonato sódico. 
-Alcohol etílico de 96º. 
-Células epiteliales. 

 REALIZACIÓN 
1.- Preparar un tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:  
     -120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.  
     -1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.  
     -5 g de bicarbonato sódico.  
    - 5 ml de detergente líquido o champú.  

2.-Coge 15 ml de tampón y ponlo en un vaso 
3.- Pon en la boca unos 20-25 ml de agua (una cucharada) y enjuágate bien, moviendo el agua de una mejilla a la otra. Escupe el agua en el vaso donde está el tampón.  
4.- Mueve ligeramente para que se mezclen ambas soluciones, pero sin agitar, para evitar la formación de espuma 
5.- Pipetea 15 ml de alcohol (debe estar frío. Si no lo está puede no salir bien). El alcohol debe deslizarse cuidadosamente por las paredes del vaso. Esto es muy importante para que el ADN no se rompa. 
6.- Mueve ligeramente el vaso hasta que veas que aparece un precipitado. El ADN no es soluble en alcohol, por lo que precipita en forma de “hilos” que pueden observarse a simple vista y recogerse con una varilla o un gancho. 

CUESTIONES 
1.- ¿Qué aspecto tiene el ADN obtenido? 
2.- ¿Para qué hemos utilizado sal? Razona la respuesta. 
3.- ¿Y el alcohol? Razona la respuesta. 
4.- Busca información sobre Rosalind Franklin: ¿Cómo llegaron las imágenes del ADN a manos de Watson y Crick? ¿Reconocieron estos científicos el trabajo realizado por Franklin? ¿Por qué crees que fue así? 
5.- Escribe tus conclusiones.